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項目經(jīng)歷（案例一）

項目時間：2009-01到2016-03

項目名稱：轉(zhuǎn)基因生物新品種培育科技重大專項

項目描述：

項目介紹

課題總體目標(biāo)：

克隆大豆胞囊線蟲的致死基因，通過體外RNAi鑒定這些基因的功能。運用轉(zhuǎn)基因技術(shù)在大豆根中表達上述候選基因的dsRNA，驗證植物介導(dǎo)的RNAi對大豆胞囊線蟲的致死作用。獲得具有自主知識產(chǎn)權(quán)的控制大豆胞囊線蟲的相關(guān)基因和方法。為培育大豆抗胞囊線蟲種質(zhì)提供新基因和新方法。

研究內(nèi)容：

1. 以秀麗線蟲的致死基因為參照標(biāo)準，克隆大豆胞囊線蟲的同源致死候選基因。

2. 建立體外大豆胞囊線蟲的RNAi技術(shù)體系，驗證所克隆的上述候選基因的功能。

3. 通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)，在大豆根系中表達上述候選基因的dsRNA，研究植物表達的dsRNA對大豆胞囊線蟲體內(nèi)相應(yīng)基因的下調(diào)作用及致死作用。

4. 進一步檢測轉(zhuǎn)基因根系喂食的胞囊線蟲中目的基因的表達特征，以確認所用方法的可靠性。

我接手本項目需承擔(dān)的工作

1.大豆胞囊線蟲的分離純化、鑒定、培養(yǎng)。

2.胞囊線蟲對轉(zhuǎn)基因大豆根系的侵染研究。

3.檢測根系對線蟲的抗性。

我的職責(zé)

接手項目合作伙伴的前期工作，繼續(xù)完成項目包含的內(nèi)容。

主要發(fā)表的文章：發(fā)根農(nóng)桿菌介導(dǎo)不同基因型大豆轉(zhuǎn)化效率的篩選.河南農(nóng)業(yè)科學(xué),2012

專利：

1.一種大豆胞囊線蟲抗性鑒定方法。專利編號：201110125396

2.大豆胞囊線蟲RNA解旋酶CGH-1及其編碼基因與應(yīng)用。CN201110317555.5

項目經(jīng)歷（案例二）

項目時間：2013-07到2016-03

項目名稱：國家自然科學(xué)基金項目子課題——獼猴桃種質(zhì)基因組遺傳多樣性及種間親緣關(guān)系研究

項目描述：

項目介紹

本項目主要 1）從EST序列和基因組測序數(shù)據(jù)中大規(guī)模開發(fā)SNP分子標(biāo)記，在獼猴桃資源庫中的代表性種質(zhì)中對部分SNP進行高通量分型驗證，用于獼猴桃種質(zhì)的遺傳評價；2）同時開發(fā)品種/物種特有SNP標(biāo)記，用于獼猴桃種質(zhì)的分子鑒定。

最終，1）得到了100多個SNP標(biāo)記，很好地解析了所用種質(zhì)遺傳背景，指導(dǎo)種質(zhì)開發(fā)利用和核心種質(zhì)庫構(gòu)建；2）開發(fā)得到一批獼猴桃屬物種及品種特異SNP標(biāo)記用于品種鑒定；研究結(jié)果兼具重要的理論和應(yīng)用價值。

我的職責(zé)

全程負責(zé)實驗操作及數(shù)據(jù)分析工作：1.大量閱讀文獻，了解研究背景，發(fā)現(xiàn)問題并確定研究課題；2.明確研究方法，對生物信息學(xué)開發(fā)得到的SNP標(biāo)記進行篩選，用MassARRAY DNA質(zhì)譜儀進行SNP分型驗證。對分型數(shù)據(jù)進行分析應(yīng)用于獼猴桃種質(zhì)資源評價，并開發(fā)獼猴桃物種或品種特有SNP用于種質(zhì)的分子鑒定；3.論文撰寫；

項目經(jīng)歷（案例三）

項目時間：2011-01到2016-03

項目名稱：北京市農(nóng)林科學(xué)院科技創(chuàng)新專項 “生防種質(zhì)資源庫建設(shè)與綜合利用” (KJCX201101001)

項目描述：

項目介紹

研究目標(biāo)

1.通過對中國特殊生境地區(qū)土壤采集，分別進行樣品分離，培養(yǎng)，篩選，保存等工作，初步對土壤細菌、真菌、放線菌、酵母菌等微生物進行分離保存。

2.通過對初步篩選的土壤微生物進行多種病原菌抑菌譜測定，明確不同土壤微生物對應(yīng)不同靶標(biāo)病害，為明確土壤微生物對靶標(biāo)病害的生防機制提供依據(jù)。

3.采用16SrDNA ITSrDNA基因序列初步鑒定具有生防作用的土壤微生物，同時根據(jù)菌株形態(tài)特征，生理生化特性、碳源利用等指標(biāo)，進一步鑒定菌株分類，為鑒定微生物新種質(zhì)資源及具有生防機制菌株奠定基礎(chǔ)。

主要研究內(nèi)容：

1.菌株的分離及保存：將西藏、貴州、青海等特殊生境地區(qū)采集的土壤樣品，進行稱樣，加水，搖晃培養(yǎng)，按一定稀釋倍數(shù)分別涂布于PDA、馬丁、牛肉膏蛋白胨、YPD等培養(yǎng)基，進行放線菌、真菌、細菌、酵母菌的分離培養(yǎng)，挑選及保存工作。

2.菌株的抑菌譜測定：將挑選出來的各類菌株分別對葡萄炭疽、黃瓜枯萎、番茄灰霉等病原菌進行對峙培養(yǎng)，挑選具有生防作用的微生物菌株。

3.菌株的種類鑒定：將具有生防作用的真菌進行ITS序列鑒定，細菌及放線菌進行16S鑒定，初步明確微生物種屬。結(jié)合形態(tài)特征，生理生化特性及碳源利用等指標(biāo)進一步鑒定生防微生物。

我的職責(zé)

項目的參與者之一，主要負責(zé)從中國特殊生境西藏、貴州、青海地區(qū)采集土樣，負責(zé)土壤細菌、真菌、放線菌等微生物的分離，培養(yǎng)，篩選，保存，及部分菌株的鑒定工作。

發(fā)表的文章：一株生防細菌的分離鑒定及其抑菌活性物質(zhì)的分析.中國農(nóng)學(xué)通報，2012

項目經(jīng)歷（案例四）

項目時間：2014-01到2016-03

項目名稱：北京市農(nóng)林科學(xué)院青年科研基金

項目描述：

項目介紹

研究目標(biāo)

（1）通過對多粘類芽孢桿菌抗生素產(chǎn)物分離鑒定及高效液相色譜法檢測，明確不同來源的兩株多粘類芽孢桿菌Fusaricidins 類型，建立Fusaricidins檢測體系。

（2）通過對Fusaricidins提取物進行多種病原菌抑菌譜測定，確定主要靶標(biāo)病害，為其生防產(chǎn)品的開發(fā)和登記試驗提供依據(jù)。

（3）優(yōu)化Fusaricidins 類抗生素發(fā)酵工藝，放大到5L、30L發(fā)酵罐，為提高產(chǎn)品質(zhì)量、降低生產(chǎn)成本奠定基礎(chǔ)。

主要研究內(nèi)容：

（1）Fusaricidins 類抗生素分離鑒定：將兩株多粘類芽孢桿菌發(fā)酵液經(jīng)酸化加熱離心萃取，通過層析、高效液相色譜法分離純化并檢測Fusaricidins，確定其類型及濃度。

（2）Fusaricidins 類抗生素生物活性驗證：以甘藍枯萎病、番茄灰霉病、黃瓜枯萎病等多種病害為靶標(biāo)，進行抑菌譜的檢測及盆栽試驗防治效果驗證。

（3）Fusaricidins 類抗生素發(fā)酵工藝研究：發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵參數(shù)的優(yōu)化，建立高產(chǎn)發(fā)酵工藝，并進行不同體積發(fā)酵罐放大驗證。

我的職責(zé)

項目的執(zhí)行者

主要發(fā)表的文章：Expression of Paenibacillus polymyxa -1,3-1,4-glucanase in Streptomyces lydicus A01 improves its biocontrol effect against Botrytis cinerea. Biological Control,2015